Elisa檢測實驗有很多關鍵技術點,在前面的資訊內容中也為大家介紹過不少。今日,我司要為大家講解ELISA試劑盒實驗加樣中的注意事項,以供大家參考:
1.細胞上清:前處理必須是細胞離心去除,每孔直接加100μl即可。如果濃度太高需稀釋時,用標準品稀釋液直接稀釋。
2.腦脊液:前處理必須是細胞離心去除,每孔直接加100μl即可。如果濃度太高需稀釋時,用標準品稀釋液直接稀釋。
3.血清血漿:請加入50ul樣本分析緩沖液后加50ul標本,如稀釋量大,請將樣本與樣本分析緩沖液等量加入,不足部分用標準品稀釋液補充至100ul。
A 血清標本應是自然凝固后,取上清,避免在冰箱中凝固血液;
B 血漿標本,推薦用EDTA的方法收集若待測樣本不能及時檢測,標本收集后請分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融。
C 血清標本不應添加任何防腐劑或抗凝劑;
D 標本應清澈透明,檢測前樣本中如有懸浮物應通過離心去除。
E 請勿使用溶血,高血脂或污染的標本檢測,否則結果將不準確。
4.組織勻漿液的樣本,要制備過程中需要在緩沖液中加入蛋白酶抑制劑,防止蛋白成份被內源性蛋白酶降解,造成檢測結果的值偏低。
因組織勻漿液的樣本蛋白種類多,含量豐富,實驗參照血清血漿標本的處理方法進行,否則就會影響實驗結果。具體是加入50 ul樣本分析緩沖液后加50 ul標本,需稀釋時,請將樣本與樣本分析緩沖液等量加入,不足部分用標準品稀釋液補充至100ul。
因為目標蛋白不同,可能造成降解的蛋白類型可能不一樣,如果實驗前通過文獻確定用哪種蛋白酶抑制劑,有針對性加入,可節省抑制劑。如果查不到相關文獻,可采用組合抑制的辦法確保蛋白不易被降解。
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