昨天下午，我公司收到一位客戶對(duì)實(shí)驗(yàn)的咨詢留言。這位客戶說(shuō)道：“初次做間接ELISA，做了幾次結(jié)果都沒(méi)有顯色，原因在哪里呢”
   

    收到留言后，吳為客戶安排技術(shù)去。針對(duì)問(wèn)題描述，上海恒遠(yuǎn)技術(shù)員分析出為何間接ELISA沒(méi)有顯色，可能原因有這幾個(gè)方面：

1.包被原：包括你的包被液有無(wú)問(wèn)題，有沒(méi)有配錯(cuò)。包被原一般加100微升，37度2小時(shí)；

2.封閉：封閉液用的是否適合？你說(shuō)做了幾次都沒(méi)顯色，空白孔也不顯嗎？如果空白也無(wú)顏色，那封閉就沒(méi)有問(wèn)題。一般封閉是200微升每孔，也可以滿孔封閉

3.一抗：檢查你的一抗是否失效。是否是在37度反應(yīng)

4.二抗：底物，底物緩沖液……這些都要好好檢查！

5.洗滌：用PBST洗滌，包被和封閉時(shí)洗板3次；一抗二抗洗滌5次，每次間隔3分鐘。
                     

    手工和機(jī)器洗滌沒(méi)什么不同，就是省力一些。洗5次不會(huì)有負(fù)影響，在一抗和二抗洗滌過(guò)程中，恰恰需要多洗幾次，這樣有助于減少非特異性吸附。

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