不少朋友在為春節前的zui后一次實驗認真準備著,而在實驗的過程中大大小小的問題總會遇到一些。今天上午,一位來自上??蒲兴目蛻魧O老師來電與我公司技術專員交流ELISA實驗問題。在交流的過程中,孫老師表示:
“做定量要驗證試劑盒的線性范圍,目前我的盒子線性范圍太窄,線性區間的高點與低點的濃度值比值為16。我嘗試了改變反應模式,將線性范圍略擴寬了一些——線性區間的高點與低點的濃度值比值為32。如果高點往上一個梯度延伸,則R平方就只有0.96(已經是的結果了)??偟膩碚f線性范圍還是太窄。我參考了其他一些廠家的ELISA定量試劑盒,基本上線性區間的高點與低點的濃度值比值都≥64。我知道,ELISA的信號值范圍窄,但我想線性區間的高點與低點的濃度值比值≥64應該還是可以的。那么如何才能將試劑盒的線性范圍擴寬?"
對此,上海恒遠技術專員分析解說到:試劑盒的線性范圍影響的主要因素應該是抗體本身的性質,其次才是ELISA反應的各種條件。如果在優化了各種反應條件下線性范圍還是很窄,只能說制的抗體不是很好。而線性范圍的影響有兩個因素,*個可能因素是本身抗體的親和力,親和力越高靈敏度越高,高點與低點比值也就越高,若標準曲線的斜率接近于1,抗體親和力還是可以的。比值沒有相關規定說一定要高于64。
第二個可能因素是本身抗原的影響。不同的蛋白ELISA其靈敏度都不相同,線性范圍也不同,如果你的項目在某一濃度達到平臺值,說明這個蛋白與其抗體結合與解離在此濃度下達到了平衡,改變其他條件也無法增加,除非改用化學發光法。若是同一種蛋白其線性范圍沒有其他盒子做的高,可嘗試改變條件降低其背景值從而降低低濃度來提高比值。
我公司售前、后服務完善,提供ELISA技術指導與免費代測服務,供應國產、進口試劑盒。上海恒遠試劑盒讓ELISA實驗更加精彩!歡迎您業務員。
下一篇:用于含量測定的標準品現貨如何驗收