Elisa試劑盒是一種敏感性高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法。雖然elisa試劑盒的操作步驟看似簡(jiǎn)單，但沒做到位的話就會(huì)影響實(shí)驗(yàn)的效果。所以elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)時(shí)至關(guān)重要的步驟有：
*、重要的洗滌：
不充分的洗滌會(huì)導(dǎo)致差異和高背景，從而帶來不理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。如果未結(jié)合的材料殘留在微孔板中，那么它會(huì)增加背景噪音。有必要的話，可增加洗滌液中的鹽濃度，這會(huì)阻止非特異結(jié)合反應(yīng)。如果背景過高，懷疑洗滌不夠時(shí)，可以嘗試增加洗滌次數(shù)。
第二、關(guān)鍵的封閉：
封閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結(jié)合位點(diǎn)。這就降低了可產(chǎn)生信號(hào)的抗體非特異結(jié)合的機(jī)會(huì)。如果背景過高，懷疑封閉不充分，那么可以嘗試使用更高濃度的封閉液，或適當(dāng)延長(zhǎng)封閉時(shí)間。
目前主要有兩種類型的封閉液：蛋白和非離子型去污劑。使用的類型須取決于多個(gè)因素，包括微孔板的表面試劑、吸附的抗原、抗體和檢測(cè)試劑。好的封閉液應(yīng)降低非特異性結(jié)合，但它不應(yīng)當(dāng)與抗原、抗體或檢測(cè)試劑發(fā)生相互作用。
第三、抗體濃度須優(yōu)化：
如果試劑稍有不同，則可能需要優(yōu)化抗體的量。非特異的抗體結(jié)合會(huì)增加背景。為了防止這一點(diǎn)，切勿使用過多的一抗或二抗。
第四、檢測(cè)試劑要適量：
切勿使用過多的檢測(cè)試劑。如果濃度過高，或者未正確稀釋，則會(huì)導(dǎo)致高背景。也不要顯色過度，如有必要，優(yōu)化一下何時(shí)應(yīng)加入終止液。
只有確保每一步操作都做到位，才會(huì)呈現(xiàn)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。所以elisa實(shí)驗(yàn)的每一步都很重要，不可以掉以輕心。